如何建立PCR实验室

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如何建立PCR实验室

  1、建立样品准备区　　

 ⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。

 ⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。

 ⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。

 ⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。

 ⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。

 ⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。

 ⑺任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。　　

  2、样品准备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。　　

  3、建立前PCR区。　　

 该去专门用于准备各种反应，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。　　

  4、PCR实验室试剂的操作。　　

 ⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。

 ⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。

 ⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品